Родилась 6.11.1479. Дочь Изабеллы I Кастильской и Фернандо II Арагонского, родная сестра Каталины Арагонской, первой жены Генриха VIII Английского.

С самого детства Хуана была шахматной фигурой в руках своих родителей, которую они использовали в европейской политической игре с целью завоевать ещё большее могущество.

В 1497, через полгода после свадьбы, умер Хуан, единственный сын Изабеллы и Фердинанда. Их старшая дочь Изабелла была выдана замуж за Мануэля Португальского, но и она скончалась во время родов в 1498. Двумя годами позже умер её младенец — сын Мигел. Так Хуана, третий ребенок королей-католиков, стала наследницей огромной империи.

Чтобы ещё больше укрепить могущество Испании, Хуану выдали замуж за Филиппа, правителя Фландрии и Бургундии, сына императора Максимилиана I, вероятного наследника императорской короны. В 1502 Хуана и Филипп были представлены кортесам как будущие наследники Кастилии и Арагона.

Перед Хуаной и Филиппом лежало самое богатое наследство в мире, но ни она, ни он не подходили для владения им. Хуана с молодости была склонна к неврозам. Она была богобоязненна и боготворила родителей, но больше всего на свете любила своего мужа.

Филипп, молодой красавец, эгоист, хитрец и бабник, не пропускал ни одной хорошенькой женщины из своего окружения, чем вызывал у жены приступы патологической ревности. Более того, Филипп заявил, что ему не нравятся чопорные кастильские обычаи, и удалился во Фландрию к своим многочисленным любовницам, оставив в очередной раз беременную жену в Испании.

Узнав, что муж уехал, Хуана впала в бешенство и совершенно потеряла голову. Она рвалась вслед за супругом, намереваясь даже проехать через территории Франции, где в то время шла война. Мысль о том, что Филипп дома незамедлительно окружит себя роскошными красавицами, сводила её с ума. Состояние её было так тяжело, что мать была вынуждена поместить её под охраной в замок Ла Мота.

Но после очередного скандала, когда Хуана наговорила матери множество резких слов, ей дали уехать и в апреле 1504 она вернулась в Нидерланды. Обнаружив, что Филипп действительно завёл себе фаворитку, Хуана обрезала той роскошные волосы. Отношения между супругами заметно испортились, и они стали жить раздельно.

В 1504 умерла Изабелла, назвав Хуану своей преемницей, с условием, что если она будет отсутствовать в королевстве или окажется неспособной править, вести дела в Кастилии от её имени будет супруг Изабеллы Фернандо II Арагонский. Однако Филипп также заявил о своих правах на кастильскую корону. 28.04.1506 он высадился в Ла-Корнунье (Галисия) с армией немецких наёмников и двинулся на юг, намереваясь короноваться.

Фернандо Арагонский, непопулярный среди кастильских вельмож, счёл за благо не оказывать сопротивление. 27.06.1506 Фернандо и Филипп заключили полюбовное соглашение, объявив Хуану неспособной править, и разделили власть между собой. Однако 25.09.1506 Филипп неожиданно умер, и власть полностью оказалась в руках Фернандо II.

Хуана преданно ухаживала за больным мужем и когда он умер была буквально сражена горем. Она лично сопровождала гроб с телом мужа в Гренаду, где его должны были захоронить. Процессия передвигалась исключительно по ночам, так как по её словам: "бедной вдове, потерявшей солнце своей души, незачем показываться на свете дня". Дни Хуана проводила в монастырях. В женских монастырях она не останавливалась, любым женщинам приближаться к телу было запрещено.

По дороге она дважды приказывала остановиться и вскрыть гроб, чтобы проверить, не похищено ли тело Филиппа фламандцами. Хуана так и не доехала до конца путешествия. В пути у неё начались родовые схватки, и 14.01.1507 она родила дочь Каталину.

Фернандо, вернувшись в Испанию с Сицилии, заточил Хуану в дворец-крепость Тордесильяс близ Вальядолида, где она пробыла 46 лет, хотя всё это время формально оставалась королевой Кастилии (больше, чем какой-либо другой монарх Испании).

На протяжении нескольких лет она держала при себе забальзамированное тело мужа, не давая его похоронить. Хуана была полностью изолирована от окружающего мира. Ей ничего не говорили о происходящем вокруг и не разрешали даже посещать службы в соседнем монастыре Санта-Клара, где в конце концов был похоронен её муж. Она перестала следить за собой, потеряла аппетит и даже отказывалась посещать мессу.

В 1520 Хуана неожиданно вернулась на политическую сцену. В Кастилии вспыхнуло восстание недовольных правлением старшего сына Хуаны, Карла I и его фламандских советников. Мятежники хотели вернуть трон законной королеве и захватили Тордесильяс. Однако Хуана оказалась совершенно неготова к такому повороту событий и в конце концов отреклась от повстанцев. 23.04.1521 они были разбиты при Вильяларе.

Хуана вновь вернулась в своё заточение. Она всё больше погружалась в мир маниакальной депрессии. Была безразлична к окружающим и не обращала внимания на свою внешность. Даже религия стала вызывать у неё отвращение, что вызвало у окружающих подозрение в одержимости королевы дьяволом. По словам Хуаны, её окружали злые духи. Она рисовала привидение кота, который пожирал душу её матери, разрывал на куски тело её отца и ждал, чтобы разодрать и её тело.

Хуана умерла 12.04.1555, на страстной неделе. Её безответная любовь, преданность и ревность вдохновляли художников, поэтов, композиторов и кинематографистов на создание многочисленных произведений искусства.

От брака с Филиппом у неё родилось шестеро детей, поистине венценосных:

Элеонора (1498-1558) — с 1518 третья супруга короля Мануэла I Португальского, с 1530 вторая супруга короля Франции Франциска I,

Карл (1500-1558) — в 1516-1522 эрцгерцог Австрии, в 1516 ставший первым королём объединённой Испании (хотя именовался — король Арагона Карл I), с 1520 — император Священной Римской Империи Карл V,

Изабелла (1501-1526) — с 1514 супруга датского короля Христиана II,

Фернандо (1503-1564) — с 1522 эрцгерцог Австрии, с 1526 король Венгрии и Богемии, с 1556 император Священной Римской империи Фердинанд I,

Мария (1505-1558) — супруга короля Венгрии и Богемии Лайоша II,

Каталина (1507-1564) — с 1525 супруга короля Португалии Жуана III.